白细胞介素-10启动子-1082和-819位点基因多态性与肠易激综合征的关系

肠易激综合征(IBS)是一种常见的肠道功能紊乱性疾病，病因尚不清楚，可能与肠动力紊乱、、内脏感觉超敏、炎症、应激和情感障碍等因素有关。有研究显示，遗传因素可能与IBS发病有关。IBS患者存在持续的肠黏膜炎症的原因和机制尚不清楚，但部分患者可能存在促炎和抑炎细胞因子合成失衡的遗传素质。白细胞介素(IL)-10作为人体内最重要的抑炎性细胞因子而受到广泛关注，其基因多态性与IBS易感性有关。我们研究IL-10基因启动子区-1082及-819位点基因多态性，探寻其在IBS发病中的意义。

材料和方法

一 研究对象

IBS患者来自2008年6月至2009年6月期问到广州市第一人民医院消化科就诊、无亲缘关系、愿意参加本研究且签署知情同意书者。共313例，其中男123例，女性190例，平均年龄（42. 3±14.6）岁。病程(70. 1±29.3)个月，人选标准包括：①根据IBS调查问卷符合罗马Ⅲ诊断标准的年龄≥18岁患者，且无其他功能性胃肠病；②进行大便常规和细菌学检查以及结肠镜检查或x线钡灌肠，排除器质性疾患；③广东籍汉族居民对照组选自同期健康体检者，共281名，其中男120名，女性161名，平均年龄(43. 7±13.9)岁。人选标准包括：①无功能性胃肠病；②无消化系统及其他系统器质性疾病广东的汉族人；③年龄和性别与病例组类似。排除标准：严重心理精神异常、甲状腺功能亢进、糖尿病、功能性消化不良、腹部盆腔手术、胆囊结石和子宫肌瘤。吸烟、饮酒、服药史、年龄和性别构成在对照组与病例组问差异无统计学意义（P>0.05）。

二 罗马Ⅲ诊断标准

IBS采用2006年制定的罗马Ⅲ诊断标准并按照其分型标准将IBS分为四个亚型，即腹泻型、便秘型、混合型及未定型。

三 基因型检测

采用聚合酶链式反应结合限制性片段长度多态性分析( PCR-RFLP)对IL-10启动子区-1082和-819位点进行基因型检测。外周静脉血采用QIAampDNA Mini试剂盒（Qiagen公司）提取DNA。IL-10-1082位点上游引物：5’-AACACTCCTCGCC-GCAACC-3’，下游引物序列：5’-TCTTACCTAT-CCCTACTTCC-3’，目的基因片段长度为143bp。反应条件：95℃预变性2min，后95℃40 s，57℃40 s，72℃1 min，37个周期后72℃延伸10 min。PCR产物经快速限制性内切酶FastDigest Mnl Ⅰ（Fermentas公司）酶切10 min，酶切产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带，分析基因型。-819位点上游引物为：5’-GACAACACTA-CTAAGGCTCCTTTGGCA-3’，下游引物：5’-GTGAGCAAACTGAGGCACGAAAT-3’, 目的基因片段长度315 bp，PCR反应条件和随后分析基因型基本同-1082位点，但不同之处是60℃退火40 s和循环30个周期，以及用快速限制性内切酶FastDigest SspⅠ(Fermentas公司)酶切。

四 统计学方法

统计分析应用SPSS 13.0统计包进行，IL-10启动子-1082和-819位点等位基因及基因型的频率采用直接计算法，两样本率的比较用x2检验，研究对象与基因遗传平衡规律（Hardy-Winberg平衡）的符合程度采用X2检验分析，公式为：x2＝∑（期望值—预计值）／期望值，自由度尊基因型数目—等位基因数目。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一 Hardy-Weinberg平衡检验

在-1082位点与-819位点，IBS组、对照组和总人数组中，各基因型的分．布符合Hardy-Weinberg平衡规律，说明本试验人群1L-10基田分布可反映整体人群基因的分布情况。

二 二个位点基因型

-819位点C/T基因型PCR产物经SspⅠ酶切后形成315 bp、291 bp和24 bp三种片段，T/T基因型形成291 bp和24 bp二种片段，C/C基因型只有315 bp一种片段。-1082位点PCR产物经Mnl Ⅰ酶切后只有143 bp一个片段的为A/A基因型，含有143 bp、119 bp和24bp三种片段是A/G基因型，含有119和24 bp二种片段的是G/G基因型。

三 IL-10-819位点C、T等位基因及IL-10-1082位点A、G等位基因发生率

IL-10-819位点C、T等位基因及IL-10-10 8 2位点A、G等位基因发生率在IBS组与对照组两组间差异无统计学意义。IL-10-819位点C等位基因频率在IBS各亚型间差异无统计学意义(P>0.05)，T等位基因频率腹泻型(79.8%)和混合型(77.1%)显著高于对照组（65.7%，P<0，05），便秘型与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。IL-10-1082位点A、G等位基因频率在各亚型与对照组间差异无统计学意义（P>0.05），腹泻型与混合型间差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

四 IBS组-819位点T/T基因型频率

IBS组-819位点T/T基因型频率(51.1%)显著高于对照组(40.2%)，C/T基因型显著低于对照组，差异均有统计学意义（P值均<0.05）；C／C基因型与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；-819位点T/T基因型频率IBS的各亚型组显著高于对照组，C/T基因型IBS各亚型显著低于对照组，差异均有统计学意义（P值均<O．05）；C/C基因型在各亚型间差异无统计学意义（P>0.05）。-1082位点基因型在IBS组和对照组间的差异无统计学意义(P>0.05)；IBS腹泻型的-1082位点A/A基因型(93.3%)显著高于混合型IBS(82.4%)，A/G基因型低于混合型IBS，差异均有统计学意义（P值均<0.05）；但IBS其他亚型问以及与对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

讨论

IBS被认为是多因素综合作用的结果，炎症及黏膜免疫系统激活可能起重要作用。虽然对IBS患者为何存在持续的肠黏膜炎症了解不多，但遗传因素可能起一定作用，部分患者可能存在促炎和抑炎性细胞因子合成失衡的遗传素质。

L-.因的转录起始部位上游-1082(G/A)、-819( C/T)和-592( C/A)处有3个单核苷酸多态性位点。启动子区多态性与IL-10表达水平有密切联系，-1082G、-819C和-592C相对于-1082A、-819T和-592A为高表达等位基因，它们的IL-10生成是低表达等位基因型的2-3倍。

IL-10基因启动子区单核苷酸多态性与IBS的关系尚有争议。英国的230例IBS和450例对照研究发现，IBS者IL-10高表达基因型(-1082G/G)频率较对照显著降低（21%比32%）。伊朗有关学者也有类似的发现。而另- 111例IBS患者和162例对照者的研究认为，高产生肿瘤坏死因子和低产生IL-10基因型与IBS和腹泻型有关; 韩国的94例IBS患者与88例对照者的研究认为-1082位点与IBS无关。国内43例腹泻型IBS的研究发现-819 T/T和-592A/A基因型可能与腹泻型IBS发生有关，而-1082位点未见有关。我们发现，IBS组-819T/T基因型频率显著高于对照组，C/T基因型显著低于对照组。除国内一项研究腹[泻型IBS外，国外研究由于样本量限制，未将IBS各亚型的IL-10基因多态性进行研究。我们观察到IBS各亚型的-819位点T/T基因型频率显著高于对照组，腹泻型和混合型IBS的T等位基因频率显著高于对照组。T/T型是低表达基因型，该基因型IBS患者的IL-10生成减少则抑炎效应降低，黏膜炎症持续存在。本研究还发现，在腹泻型IBS的-1082的A等位基因和A/A基因型频率显著高于混合型IBS，A/A基因型也是IL-10低表达。以上结果表明IBS患者抑炎细胞因子；生成减少的遗传素质在IBS发病机制中有一定作乍用。但未见-1082位点与IBS有关，这与韩国人结果相符合，中国人的-1082位点G等位基因频率(2.5%)较爱尔兰、墨西哥等人种（34.8% -57.5%）显著低，说明不同人种某些参与炎性反应的细胞因子基因多态性分布不同，而且中国人其他基因的等位基因频率也与国外的不同。

综上所述，IL-10基因多态性在IBS各亚型的发病中具有一定意义，但IBS是多因素相关的紊乱，某个炎性因子遗传因素仅对小部分患者起作用。来源：华语消化网