丙肝病毒单顺反子复制子功能测定

近日，李雪黎、雷宇、钟珊等人发表论文，旨在构建丙型肝炎病毒（HCV）单顺反子复制子，研究其在Huh7.5和Huh7.1细胞中的复制功能，为研究HCV复制规律和抗病毒药物的筛选建立模型。研究组成功构建了HCV-IRES单顺反子复制子，转染Huh7.5和Huh7.1细胞后在不同时间均有复制。该文发表在2012年第20卷第2期《中华肝脏病杂志》上。

　　用Quick change点突变方法删除pJ6JFH 1B1aRL质粒上的Core-E1-E2-p7-NS2片段（约3090 bp），得到△pJ6JFH1B1aRL，然后测序，选择序列正确的克隆，用AgeⅠ和AvrⅡ酶切回收目的片段约2280bp，同时用AgeⅠ和AvrⅡ酶切pSGRJFH1和其突变体质粒，回收载体片段。将目的片段和载体片段连接，构建由HCV-IRES启动的单顺反子复制子pSGRm-JFH IblaRL以及其变异突变体pSGRm-JFH 1b1aRLGND，用其RNA转染Huh7.5和Huh7.1细胞，研究复制子在细胞中的复制情况。

　　经过Quick change和多步克隆方法成功构建HCV-IRES启动的单顺反子复制子，复制子RNA转染Huh7.5和Huh7.1细胞72h后复制达高峰，96h复制开始下降，而对照的突变体从24h至96h均没有复制。来源：医学论坛网