RNA干扰技术增强食管癌ECA109细胞放射敏感性

最近，河北医科大学第四医院放疗三科的研究人员的一项研究显示，RNA干扰技术可以有效地抑制食管癌细胞ECA109中53BP1基因的表达，从而增强ECA109细胞的放射敏感性。该研究发表于2012年第3期《中国癌症杂志》。

　　该研究旨在利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109细胞53BP1基因表达，观察其对放射线照射后细胞周期和放射敏感性的影响。

　　刘志坤等研究人员针对53BP1 mRNA序列，设计合成3对有效的干扰序列(siRNAl、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列，与载体pSIH1-H1-copGFP连接形成重组质粒，瞬时转染细胞，实时PCR(real-time PCR)和Western blot检测53BP1的表达，筛选有效干扰序列，与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞，收集病毒液，感染ECA109细胞，获得稳定转染细胞系，命名为ECA109/B，转染空载体组命名为ECA109/N。采用real-time PCR和Western blot测定53BP1在mRNA水平和蛋白水平的表达。采用MTT、流式细胞术和克隆形成实验检测RNA干扰53BP1基因对ECA109细胞放射敏感性的影响。

　　结果，成功构建p53BP1-shRNA质粒，3对干扰序列对人53BP1基因的表达在mRNA和蛋白水平显著低于阴性对照组和空白对照组，尤以siRNA1组效果最明显，取干扰效果最好的siRNA1，利用慢病毒包装系统，共同转染293T细胞，收集病毒液，感染ECA109细胞，荧光显微镜下挑取阳性克隆，扩大培养，获得稳定转染细胞株ECA109/B，53BP1基因在mRNA和蛋白表达水平亦低于对照组；MTT结果表明53BP1低表达对细胞的增殖无明显影响，用流式细胞术分析显示5 Gy射线照射后，ECA109/B的G2/M期比例明显低于阴性对照组和空白对照组；克隆形成实验的结果显示ECA109、ECA109/N、ECA109/B细胞的D0值分别为3.06、2.90和2.07 Gy；SF2值分别为0.91、0.89和0.79；Dq值分别为1.59、1.47和1.21，可见ECA109/N、ECA109放射敏感性未见明显差异，而ECA109/B细胞的放射敏感性高于ECA109/N、ECA109。来源：医学论坛网